Tadbir Fan Azma

آزمايش کوآگولاز


دقيقترين آزمايشی  که برای بازشناسی استافيلوکوک طلايی بيماريزا از غير بيماريزا بطور معمول بکار میرود،آزمایش کوآگولاز می باشد..(استافيلوکوک طلايی کواگولاز مثبت ، بيماريزا می باشد.)
کواگولاز سويه های استافيلوکوک اورئوس دو نوع کواگولاز دارند:


1) باند شده ( فاکتور جمع کننده نيز ناميده میشود)

2 ) آزاد


کواگولاز باند شده به ديواره سلولی استافيلوکوک مستقيما" فيبرينوژن را به فيبرين نامحلول تبديل نموده و موجب توليد توده بهم چسبيده استافيلوکوکها میشود.کواگولاز آزاد نيز با مکانيزم تا حدی متفاوت ،با کواگولاز قبلی موجب همان نتيجه میشود.کواگولاز فاکتور نشاندهنده ويرولانس میباشد و استاف اورئوس (کواگولاز مثبت ) را از ساير گونه های استافيلوککی (کواگولاز منفی) مجزا مینمايد.
نقش کواگولاز در پاتوژنز بيماری مورد بحث میباشد، ولی کواگولاز ممکن است موجب تشکيل لايه فيبرين در اطراف آبسه استافيلوککی میشود،بنابراين سبب لوکاليزه نمودن عفونت و محافظت از فاگوسيتوز میگردد.
* قبل از انجام این تست، بمنظور جلوگیری از اتلاف وقت و هزینه، ابتدا مطمئن شوید کوکسی گرم مثبت خوشه ای و کاتالاز مثبت است

آماده سازی معرف کوآگولاز:
1)ابتدا ویال را از یخچال خارج نموده و اجازه دهید به دمای اتاق برسد یک سی سی آب مقطر استریل به آن اضافه نموده و بخوبی تکان دهید تا  محتویات آن کاملا" حل شود.
2) این محلول را می توان به میزان 200 لاندا در لوله های اپندروف استریل تقسیم نمود و تا 5 روز درC°8 -2  و یک ماه در C°20-  نگهداری و استفاده نمود.
3) از منجمد و ذوب کردن مکرر معرف خودداری کنید.
* معرف لیوقیلیزه پلاسمای خرگوش را تا زمان قید شده بر روی برچسب در یخچال C°8 -2 نگهداری نماید.
روش انجام آزمایش:

الف ) آزمایش بروی لام:
1)    از کشت 24-18 ساعته باکتری مورد نظر سوسپانسیون غلیظ و یکنواختی تهیه نماید  
2)    بر روی یک لام تمیز یک قطره از این سوسپانسیون را قرار داده و یک قطره معرف پلاسمای خرگوش اضافه نموده و با لوپ و اپلیکاتور چوبی آنرا بخوبی مخلوط نمایید.
نتایج:
در صورت مثبت بودن آزمایش،10-5 ثانیه بعد از مخلوط کردن پلاسما با سوسپانسیون ذرات درشت و سفید رنگ آگلوتیناسیون ظاهر می گردد و در صورت منفی بودن این ذرات مشاهده نمی گردند .

* برای همه نتایج منفی یا مثبت تاخیری (بیشتر از 10 ثانیه) باید آزمایش به روش لوله انجام شود.

ب) آزمایش لوله ای:
1) در لوله های اپندروف که حاوی 200 لاندا از پلاسمای حل و تقسیم شده است مقدار 200 لا ندا از سوسپانسیون غلیظ باکتری( که قبلا" 24-18 ساعت کشت داده شده است) ریخته و لوله را به مدت 4 ساعت در انکوباتور  C°35 انکوبه نمایید .
2) تا 4 ساعت لوله را از لحاظ تشکیل لخته بررسی نمایید.برای این کار لوله را به آرامی کج کنید.
3) اگر لخته ای تشکیل نشد لوله را برای یک شب در حرارت اتاق قرار داده و دوباره آنرا بررسی نمایید.

نتایج:
ایجاد هر اندازه لخته در طی 24-1 ساعت به منزله مثبت بودن تست است و عدم ایجاد لخته تا 24 ساعت نشانه منفی بودن تست است.

 



¹ Strains deficient in clumping factor (slide negeative)will usually produce free coagulase tube poitive).
² Human isolates; human plasma is recommended for testing.
³ Latex agglutination is less reliable for detection of clumping factor or fibrinogen.
4  Animal isolates S.intermedius and hyicus are rarely isolated from humans.Separation



منابع:


Murry , P. R., Manual of Clinical Microbiology, 2003, 8 th editions, Washington D.C.
MacdFaddin, J.F., biochemical Tests for Identification of Identification of Medical Bacteria, 2000, 3 th editions, Lippincott Williams and Wilkins.
Koneman, E.W. and et al. Color Atlas and Textbook Clinical Microbiology, 1997, 5 th editions
Finegold, S; M, Martin, W.j.; Diagnostic Microbiology, Ed: 6, Mosby 1982
باکتری شناسی آزمایشگاهی ، نویسندگان : محبوبه نادری نسب ، دکتر طاهره راشد ، دکتر محمد ناظم

 

بهترین نمایش این وب سایت در مرورگر فایرفاکس